慢性毒性实验(从胚胎到成鱼,150天)
暴露方式:胚胎阶段同急性实验。从12天后孵化开始,将幼鱼转移至更大的养殖缸中,并继续暴露于不同浓度的实验溶液(氯化铝和GACP的多个稀释浓度)中,直至150天(图1)。
生长监测:在鱼生长到60天、90天和150天时,测量所有鱼的体重和体长;
繁殖评估:从60天开始,每天收集每个暴露缸的鱼卵,统计产卵量、受精率,评估繁殖成功率。同时,收集亲本鱼(F0代)在ZG浓度组产下的受精卵(F1代),在清洁海水中培养至12天,观察其发育情况,评估跨代毒性;
成鱼行为学分析:在鱼生长到105天时,从阴性对照组和两个ZG浓度组中挑选成鱼,进行一系列标准化的行为测试。所有行为测试均通过摄像机记录,并使用EthoVision XT进行自动分析,确保了数据的客观性和精确性;
群体行为测试:将6条鱼(3雄3雌)放入一个新水箱,记录其10分钟内的活动,分析每条鱼的运动距离和群体内个体间的平均距离,以评估群体的凝聚力;
探索能力测试(Z型迷宫):将单条鱼放入一个Z型迷宫的安全区,2分钟后打开通道,记录其5分钟内的行为。分析指标包括:离开安全区的潜伏期、运动距离、进入远端区域的次数和时间等,以评估其探索欲和胆量;
自发活动测试:将单条鱼放入一个3L的观察缸中,适应10分钟后,记录其50分钟的自发运动轨迹,分析运动距离和路径弯曲度,评估其基础活动水平;
焦虑水平测试:将单条鱼放入一个狭长的新式水箱中,记录其5分钟内的垂直位置变化。分析其在上半区停留的时间和访问次数。